5×Neoscript Fast RT-qPCR Premix plus-UNG
Cat No: HCB5142A
Neoscript Fast RT Premix-UNG (Probe qRT-PCR) est tubus speciosus valde stabilis substructus mixtus aptus ad gradum reverso transcriptioni et quantitatis PCR (qRT-PCR).Prae-mixtionem primariorum et rimatur et stabilis manet post longum tempus in repositione humilitatis.Specimen probandi directe addi potest, cum utens, sine addito tubo aperitionis/fipetentis operationis.Productum hoc partes praebet, eg polymerasium calidum DNA, M-MLV, calor sulcus uracil DNA glycosylase (TS-UNG), Rnase Inhibitor, MgCl2dNTPs (cum dUTP loco dTTP), et stabilimenta.Celeri amplificationis genere mutato transcriptase et DNA polymerase transposita, amplificationem PCR intra 20-40 minuta complere potest.Hoc gerens peculiare quiddam utitur pro qPCR cum enzymis mixtis anti-inhibitoriae amplificationis enzyme et UNG enzyme.Ergo consequi potest bonam amplificationem scopo generum et impedire amplificationem falsam quae fecit per contaminationem residua et aerosol.Hoc gerens plurimum cum fluorescentiae quantitatis PCR instrumentis componi potest a fabrica ut Acta Biosystematis, Eppendorf, Bio-Rad et Roche.
Component
1 .25×Neoscript Fast RTase/ung Mix
2.5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP)
Repono Conditions
Partes omnes servandae sunt viginti quinque per longum tempus repositionis et 4° usque ad 3 menses.Quaeso permisceto post tabida et centrifugium prius utendo.Fugientes crebris gelantur CALEFACTO.
qRT-PCR reactionem Ratio Praeparatio
| Components | 25μLSystema | 50μLSystema | Finalis intentioni |
| 5×Neoscript Fast RT Premix Buffer (dUTP) | 5μL | 10μL | 1× |
| 25×Neoscript Fast RTase/ung Mix | 1μL | 2μL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mixa | 1μL | 2μL | 1× |
| Formula RNAb | - | - | - |
| ddH2O | Usque ad 25μL | Usque ad 50μL | - |
1) a. Ultima primi concentratio plerumque 0.2μM.Ut meliores eventus, prima intentio optimized intra teli 0.2-1μM potest.In universum specillum retrahitur potest optimized intra teli 0.1-0.3μM.
2) b. Cum jejunio PCR De modo procedendi utens, primariorum intentionem augens et explorationes in melioribus amplificationibus provenire potest, eorumque ratio sic optimized erit.
3) Exempla varia genera continent diversa genera et contentum inhibitoris et exemplum numeri scopo gene.Exemplar volumen ab ipsa conditione considerari debet.Dilutionem sample cum aqua nucleaso libera vel TE Buffer, si necesse est, fac.
Reactionem Conditions
| Iusto PCR De modo procedendi | Ieiunium PCR De modo procedendi | ||||||
| De modo procedendi | Temp. | Tempus | Cycle | De modo procedendi | Temp. | Tempus | Cycle |
| Reverse Transcription | 50℃ | 10-20mins | 1 | Reverse Transcription | 50℃ | 5mins | 1 |
| Polymerase Activation | 95℃ | 1-5mins | 1 | Polymerase Activation | 95℃ | 30s | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20s | 40-50 | Denaturation | 95℃ | 1-3s | 40-50 |
| Annealing et Extensio | 56-64℃ | 20-60s | Annealing et Extensio | 56-64℃ | 3-20s | ||
Regimen quālitātis
1.Munus detectio: sensus, specificity et repeatability of qPCR.
2.Nulla actio nucleas exogenosa: nulla endonucleasis et exonuclease pollutio exogenosa.
Notae
1 .Amplificatio rate celeritatis DNA polymerasi non minus quam 1kb/10s est.Diversa PCR instrumenta habent celeritates calefactionis et refrigerationis diversas, modos temperandi et conductivity scelerisque, et sic optimizatio primitivae / speciae concentrationis et curriculi methodi in compositione cum tuo proprio instrumento velocitatis PCR essentialis est.
2.Productum hoc amplam applicabilitatem exercet, et ad summum sensitivum hypotheticum diagnosin idoneum est.Three-gradus PCR methodus primariis commendatur in furnum submissa temperatura vel amplificatione longi fragmenta super 200 bp.
3.Cum diversis amplicons diversis utendo efficaciam dUTP et diversum sensum ad UNG habent, regentes optimi esse debent si detectio sensibilitatis minuatur cum utens systemate UNG.Quaeso nobis contact technicis subsidiis si opus fuerit.
4.Ad amplificationem transmigrationis PCR productorum vitandam, area experimentalis dedicata et pipettae ad amplificationem requiruntur.Agunt cum caestibus et saepe mutant et non aperiunt per tubum post amplificationem.
