Duplex subductis RNA (dsRNA) ELISA KIT

Hoc ornamentum est Enzyme-coniunctum Immunosorbenti Assay (ELISA) coitus cum systemate biotin-Streptavidin, pro mensura quantitatis dsRNA cum longitudine supra 60 basin binorum (bp), cuiuscumque seriei.Patina pre-dsRNA anticorporis est obducta.dsRNA in sample additur et ligat elementorum puteis obductis.Tum biotinylated anti-dsRNA anticorpus additur et medetur dsRNA in sample.Lotis, HRP-Streptavidin additur et alligat Biotinylated anti-dsRNA anticorporis.Post incubationem solutus HRP-Streptavidin abluitur.Tunc solutio subiecta TMB additur et catalysata ab HRP ad producendum productum colore caeruleo quod mutatum est in flavum, solutione acidici sistendi addito.Crassitudo lutei proportionalis est scopo moles dsRNA in lamina capta.absorbance attenditur ad 450 um.

Applicationem

Hoc ornamentum est pro mensura quantitatis residua dsRNA.

Ornamentum components

Repono et stabilitas

1. Pro ornamento insueto: Totum ornamentum 2~8℃ in pluteo vita condi potuit.Fortis lux ad stabilitatem repono vitanda est.

2. Ad usum ornamentum: Cum microplata aperta est, puteos insuetos operire cum obsignatore lamella et redde ad follem in qua desiccant sarcinis, zip-obsignatio claui folliculi et ad 2~8℃ quam primum post usum redi.Ceteri regentes ad 2~8℃ quam primum post usum reddantur.

Materiae autem non suppletur

1. Microplate, lector cum 450±10nm colum (melius si deprehendere potes in 450 et 650 um necem).

2. Microplate shaker.

3. RNase liberorum apices et fistulae centrifuge.

Operatio Flowchart

Antequam tu incipe

1. Omnia ornamenta componentia et exempla ad cella temperiei (18-25℃) ante usum affer.Si ornamentum uno tempore in usu non erit, quaeso tantum detractiones et reagentes ad praesens experimentum sume et reliquas fascias et regentes in condicione postulanda relinque.

2. Lava quiddam: dilutum 40mL de 20× contractum lavabis quiddam cum 760mL aquae deiectionis vel destillatae ad praeparandum 800mL 1× quiddam abluendum.

3. Latin: breviter telas vel fabricas ex solutione stirpis ante usum.Reductio quattuor signorum provisorum est 5ng/μL.Ad signa UTP et pUTP dsRNA, quaeso solutionem stirpis ad 1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312,0.0156,0pg/μL cum STE ad lineam curvam ducere quiddam.Ad signa N1-Me-pUTP dsRNA, quaeso solutionem stirpis dilue ad 2,1,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0312, 0pg/μL cum STE quiddam ad curvam regulam ducere.Pro V-OMe-UTP dsRNA vexillum, quaeso solutionem stirpis dilue ad 4,2,1,0.5, 0.25,0.125,0.0625, 0pg/μL cum STE quiddam ad curvam regulam trahere.Commendamus signa dilui posse ut sequentia chartis:

4. Biotinylated detectio anticorpi et HRP-streptavidin solutione laborantis: breviter telas vel centrifugium solutionis stirpis ante usum.Diluunt eas operationi concentratio cum diluto quiddam.

5. TMB substate: aspira dosis necessariam solutionis cum apicibus sterilibus et solutionem residuatim in phialam denuo effunde noli.TMB substata est sensitiva ad lucem, non detectio VULGATE subiecta est lucis diu.

per protocol

1. Determinare numerum ligaminum ad primordium requiritur.Denudat in tabulas inserere pro usu.Manens lamina denudat non adhibita in hoc primordio in sacco cum desiccante reponenda.Propinquus sacculum arcte pro refrigerated repono.

2. 100μL adde singulas dilutiones vexillum, blank et specimina in puteis opportunis.Operculum cum lamina obsignatorem.Incubare pro 1hr ad cella temperies quatiens ad 500rpm.Exemplaria cum STE dilui debent ut quiddam ad accuratam tentationem retrahitur.

3. Gradum lava: Aspira solutionem et lava cum 250µL lava quiddam cuique bene et supponatur pro 30s.Relinquere lavare quiddam penitus per bracteam crepando super bibulas chartas.Prorsus IV tempora lava.

4. 100µL deprehensio biotinylated anticorporis solutionem in unumquemque bene laborantem adde.Operculum cum lamina obsignatorem.Incubare pro 1hr ad cella temperies quatiens ad 500rpm.

5. Repetere lava gradum.

6. 100μL addere ex solutione laborantis HRP-streptavidini in quamlibet bene.Operculum cum lamina obsignatorem.Incubare pro 30min at cella temperies quatiens ad 500rpm.

7. Iterare gradum iterum lava.

8. 100μL adde solutionem subiectae VUL in quamlibet bene.Operculum cum lamina obsignatorem.Incubare pro 30 min at RT Tuere a luce.Liquor caeruleum, addita solutione subiecta.

9. 50µL solutionis sistendi in quamlibet bene adde.Liquor flavum addit solutione stop.Tum lectorem microplate curre et ad 450nm statim mensura ducere.

Calculus Proventuum

1. Mediocris lectiones duplicatas pro unoquoque vexillo, potestate, et sample, et subtrahe in mediocris densi optici nulla vexillum optical.Vexillum curvam construere cum absorbance in verticali(Y) axe et dsRNA concentratio horizontalis (X）axis).

2. Commendatur ad faciendam calculum cum programmatibus computatralibus curvatis aptatis ut curva perito 1.3 vel ELISA Calc in 5 vel 4 modulo non-lineari apto.

Euismod

1. Sensibilitas:

finis deprehendendi: ≤ 0.001pg/μL (pro UTP-, pUTP-, N1-Me-pUTP-dsRNA), ≤ 0.01pg/μL (pro 5-OMe-UTP-dsRNA).

inferior quantitatis modus: 0.0156 pg/μL (pro UTP-, pUTP-dsRNA), 0.0312 pg/μL (pro N1-Me-pUTP-dsRNA), 0.0625 pg/μL (pro 5-OMe-UTP-dsRNA).

2. Subtilitas: CV intra-Assay ≤10%, CV inter-Assay ≤10%

3. Recuperatio: LXXX% ~ 120%

4.Linearity:0.0156-0.5pg/μL(forUTP-,pUTP-dsRNA)0.0312-1pg/μL(forN1-Me-pUTP dsRNA),0.0625-1pg/μL(for 5-OMe-UTP-dsRNA).

considerations

1. TMB reactionem temperies et tempus criticum est, quaeso eos secundum stricte disciplinam moderari.

2. Ut ad bonum assequendum reproducibilitatem et sensitivum tentant, propria lavatio laminarum ad reagentis un- portavit excessus removendi essentialis est.

3. Omnes reagentes permisceantur prius utendi et evitandi bumilia in sample vel regentis additione.

4. Si crystalla in compacto quiddam abluunt (20x), fovent 37℃ et leniter miscent donec crystalla perfecte dissolvantur.

5. Exemplum devita exemplorum Sodium Azide (NaN3), cum actionem HRP destruere posset in aestimatione moles dsRNA.

6. RNAse contagionem in primordio devita.

7. Vexillum/specimen, detectio anticorporis et SA-HRP etiam in RT sine concussione agi possunt, sed hoc potest deprehendere sensibilitatem minui per unum ovile.Hoc in casu commendamus signa dsRNA UTP et pUTP dilui debere ab 2pg/μL, N1-Me-pUTP dsRNA signa dilui ab 4pg/μL et 5-OMe-UTP dsRNA vexillum ab 8pg/μL dilui debere.Praeterea incubant HRP-streptavidin solutionem laborantis pro 60min in cella temperie.Do not use flak shaker, because flask shaker may result in inaccurate result.

Typical eventus

1. Latin curva notitia

2. Standard curva calculation

3. Liner detectio range: 0.0312- 1pg/μL