M-MLV Reverse Transcriptase
RevScript Reverse transcriptase obtinetur per machinationem geneticam technologiam.Superiorem cDNA habet synthesin facultatem, scelerisque stabilitatem ac reactionem limitis temperaturae (usque ad 60°C).Productum cDNA perstringitur usque ad 10 kb.Auget affinitatem exemplorum et apta est ad transpositionem of RNA templates cum complexu secundario structurae aut genesis exemplaribus.
Components
| Component | HC2003B (10,000U) | HC2003B (5*10,000U) | HC2003B (200,000U) |
| RevScript Reverse Transcriptase (200U/μL) | 50 μL | 5×50 μL | 1 mL |
| V RevScript Buffer | 250 μL | 1.25 mL | 5 mL |
Repono Condition
Productum hoc pro 2 annis -25°C~-15°C condi debet.
Unitas Definition
Una unitas 1 nmol de dTTP incorporat in materia acido-insolabili in 10 minutis ad 37°C utens Oligo(dT) ut primers.
Reactionem Setup
1.Denaturation of RNA templates (Libitum hic gradus est, denaturatio RNA templates adiuvat ad structuras secundarias aperiendas, quae fructum primi cDNA ineunt.
| Components | Magnitudo (μL) |
| RNAse gratis ddH*2O | Ad 13 |
| Oligo(dT)18 (50 μmol/L) vel Random Primer (50 μmol/L) Aut Primores Imprimis (2 μmol/L) | 1 |
| seu 1 | |
| seu 1 | |
| RNA template | X a |
Notae:
1) a: Total RNA: 1-5 ug or mRNA: 1-500 ng
2) Incubare 65°C per 5 minuta, dein statim in glaciem transferre ad frigidum per 2 minuta.Brevis centrifugatio ad liquidum colligendum reactionem, solutionem transpositionis transpositionis adde ut in sequenti tabula ostensum est.Leniter pipette miscere.
1 .Praeparatio reactionis mixtionis (20 μL volumen)
| Components | Magnitudo (μL) |
| Mixtionem priorem gradum | 13 |
| 5×Buffer | 4 |
| dNTP Mix (10nmol/L) | 1 |
| Reverse Transscriptase (200 U/μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 |
1.Reactionem praestare sub his conditionibus:
| Temperatus (°C) | Tempus |
| 25 °Ca | 5mins |
| 42 °Cb | 15-30mins |
| 85 °Cc | 5mins |
Notae:
1) a.Incubans 25°C pro 5mins tantum requiritur ad hexamers temere utendi.Quaeso transiliunt hunc gradum cum utens Oligo (dT)18or Imprimis de Primario Gene.
2) b.Commendatur transpositio temperatura contraria 42°C, Formulae enim cum structurae secundariae implicatae vel altae GC contentae, commendatur ut reactionem temperatus ad 50-55°C elevare commendatur.
3) c.Calefaciens 85°C pro 5min ad inactivate vicissim transcriptase.
4) Productum directe adhiberi potest in PCR vel qPCR motus contrarios, vel ad -20°C conditum ad breve tempus repositionis.Commendatur aliguot producta et -80°C thesaurizare ad longum tempus repositionis.Fugientes crebris gelantur CALEFACTO.
5) Productum uni-gradum RT-qPCR aptum, commendatur ut 10-20 U transversum transcriptasum addere pro omni 25μL systemate reactionis, vel sensim quantitatem transversae transcriptase augere pro re ipsa.
Notae
1.Placet custodire aream experimentalem mundam;Puri caestus et larvae in operatione gestari debent.Omnes consumptiones in experimento adhibitae RNase liberae debent esse ne contagione RNase.
2.Omnes rationes in glacie faciendae sunt ne RNA degradatio.
3.Alta qualitas RNA exempla commendantur ut alta efficientia transpositionis transcriptionis efficiantur.
4.Hoc productum est ad investigationes tantum.
5.Quaeso operare cum loricis labrum et chirothecae disponibiles, pro salute tua.
