2×Sensi Direct Premix-ung (Probe qPCR)
Cat No: HCB5151A
SensiDirect Premix-UNG (Probe qPCR) ordinatur ad perficiendum PCR immediate ex speciminibus sine DNA extractione vel praeparatione exempli.Hoc reagens constat ex polymerasi DNA calidum-initium, uracil DNA glycosylase (UNG), Rnase Inhibitor, MgCl2dNTPs (pro dTTP cum dUTP), et stabilimenta, pro quantitatis PCR (qPCR).Hoc gerens inhibitor-tolerantiae altam praestat, et sic recte applicari potest ad deprehensionem exemplorum sicut in faucium swab, saliva, anti-coagulatum totum sanguinem, plasma, et serum sine DNA extractione.Reagens utitur quiddam proprietatis pro qPCR cum enzymis mixtis anti-inhibitoriis DNA polymerasi et UNG enzyme.Ergo consequi potest bonam amplificationem scopo generum in exemplis inhibitoribus continentibus et inhibere amplificationem falsam affirmativam quae per contaminationem residua et aerosol causatur.Hoc gerens componi potest cum instrumentis maxime fluorescentibus quantitativae PCR, qualia sunt Acta Biosystematis, Eppendorf, Bio-Rad, Roche et sic in aliis.
Components
1. 50×SensiDirect Enzyme/ung Mix
2. 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP)
Repono conditionibus
Partes omnes servandae sunt viginti quinque per longum tempus repositionis et 4° usque ad 3 menses.Quaeso permisceto post tabida et centrifugium prius utendo.Fugientes crebris gelantur CALEFACTO.
Revolutio Protocol
| Gradus | Temperature | Tempus | Cycle |
| Concoctionem | 50℃ | 2min | 1 |
| Polymerase activation | 95℃ | 1-5min | 1 |
| Denature | 95℃ | 10-20s | 40-50 |
| Annealing / Extensio | 56-64℃ | 20-60s |
Pipetting mandatum
| Reagent | Volume per reactionem | Volume per reactionem | Finalis intentioni |
| 2×SensiDirect Premix Buffer (dUTP) | 12.5µL | 25µL | 1× |
| 50×SensiDirect Enzyme/ung Mix | 0.5µL | 1µL | 1× |
| 25×Primer-Probe Mix1, 2 | 1µL | 2µL | 1× |
| Sample3, 4 | - | - | - |
| ddH2O | - | - | - |
| Totalis volumen | 25 μL | 50 μL | - |
1. Postrema primi concentratio plerumque 0.2μM.Ut meliores eventus, prima intentio optimized intra teli 0.2-1μM potest.
2. Communiter, specillum retrahitur potest optimized intra teli 0.1-0.3μM.Optima intentio theprobe comparatur ad tempus reale PCR amplificationis instrumentum, genus explorationis, et genus fluitantiae substantiae fluens.Placere referri ad instrumentum manuale vel requisita specifica cuiusque probe fluorescentis.
3. Exempla varia genera continent diversas species et contentum inhibitoris et exemplum numeri scopo gene.Exemplar volumen ab ipsa conditione considerari debet.Dilutionem exempli fac cum aqua nucleaso libera vel TE Buffer, si opus est, addendo.
4. Volumine commendatur varia exempla:
| Sample | Volumen unius 50 μL reactionem | Maximum ratio |
| Totum sanguinem Anticoagulatum | 2.5 μL | 5% |
| Plasma | 15 μL | 30% |
| Serum | 10 μL | 20% |
| faucium swab | 10 μL | 20% |
| Saliva | 10 μL | 20% |
Regimen quālitātis
1. Munus detectio: sensus, specificity et repeatability of qPCR.
2. Nulla actio nuclease exogenosa: nulla endonucleasis exogenosa et pollutio exonucleasis.
Notae de Product
1. Productum hoc novo genere initiorum DNA polymerasi calidum adhibet, quod in 1-5 minutas agitari potest. Cum eius quiddam optimized reactionem est, magis apta est ad duplicem vel multiplicem fluorescentiam quantitatis PCR probandi methodum utendi.
2. Si Rn valor amplificationis PCR nimis humilis est vel amplificatio manifesto inhibetur, decrescente magnitudine exempli, augente volumen reactionem vel dilutionem prioris exempli, eventus emendare potest.
3. Collectio sanguinis, salivae, urinae, faucium swab, etc. sequi debet criteria clinica requisita, et recens specimen adhiberi potest ne degradatio acidi nucleici.
4. Cum diversis amplicons diversis utendo efficientiam ad dUTP et sensum ad UNG habeant, reagentes optimi esse debent si deprehensio sensibilitas decrescat cum ratio utens UNG.Quaeso nobis contact technicis subsidiis si opus fuerit.
5. Ad amplificationem permovendi PCR productorum inter motus unus gradus, aream experimentalem dicatam et pipettam, ad amplificationem requiruntur.Operatur cum chirothecae et mutatione saepe et non aperiunt fistulam reactionem post amplificationem PCR.
