M-MLV Neoscript Reverse Transcriptase
Neoscript Reverse Transscriptase est res adversae transcriptase consecuta mutationis protegendi M-MLV gene Moloney murini leukemia virus originis et expressionis in E.coli.Enzyme activitatem RNase H removet, tolerantiam altiorem temperaturam habet, et ad transcriptionem e contrario temperaturae aptam est.Iuvat igitur ad tollendos iniquos effectus RNA structurae altae et non specialium factorum in synthesi cDNA, et altiorem firmitatem ac transpositionem synthesis facultatem habet.Enzyme altiorem stabilitatem ac transpositionem synthesis facultatem habet.
Components
1.200 U/μL Neoscript Reverse Transcriptase
2.V Primum Strand Buffer (libitum)
* 5 Primum-Stand Buffer dNTP non continet, adde dNTPs cum systema reactionem parat
Commendatur Application
1.unus gradus qRT-pcr.
2.Virus rna deprehensio.
Repono Condition
-20°C per longum tempus repositionis, ante usum bene misceri debet, evitandae frequentes gelatae.
Unitas Definition
Una unitas incorporat 1 nmol de dTTP in 10 minuta ad 37°C utens poly(A) • oligo(dT)25ut template/primer.
Regimen quālitātis
1.SDS-PAGE puritas electrophoreticae major quam 98%.
2.Sensus amplificatio, praepostere ut- batch imperium, stabilitas.
3.Nulla actio nucleas exogenosa, nulla endonucleasis exogenous vel contagione exonuclease
Reactionem setup pro prima catena reactionem Solutio
1.Praeparatio reactionis mixtionis
| Components | Magnitudo |
| Oligo(dT)12-18 Primarius aut Random Primera Aut de Primers Gene Imprimisb | L pmol |
| 50 pmol (20-100 pmol) | |
| 2 pmol | |
| 10 mM dNTP | 1 μL |
| Formula RNA | RNA≤ 5μg;mRNA≤ 1 μg |
| RNAse-dH liberum2O | Ad 10 μL |
Notae:a/b: Elige quaeso varias formas primariorum secundum necessitates experimentales tuas.
2.Cale 65°C pro 5min et celeriter in glacie pro 2mins refrigescant.
3.Adde sequentia elementa systemati superiori totalem 20µL totalem ac leniter misce;
| Components | Magnitudo (μL) |
| V Primum-Stand Buffer | 4 |
| Neoscript Reverse Transscriptase (200 U/μL) | 1 |
| RNase inhibitor (40 U/μL) | 1 |
| RNAse-dH liberum2O | Ad 20 μL |
4.Quaeso reactionem praestare ex his conditionibus:
(1) Si Random Primer adhibetur, reactio exercenda est ad 25/X min, et deinde ad 50' pro 30~ 60 min.
(2) Si Oligo dT vel primitivae specificae adhibentur, reactio peragi debet in 50℃ pro 30~ 60minibus.
5.Cale apud 95℃ pro 5min ad Neoscript Reverse Transcriptae inactivate ac terminare reactionem.
6.Reverse transcriptio producta directe adhiberi possunt in PCR reactionem et fluorescentiam quantitatis PCR reactionis, vel ad -20℃ diu repositam.
PCR Reaction.
1.Praeparatio reactionis mixtionis
| Components | Coniunctis |
| X PCR Buffer (dNTP gratis, Mg² + gratis) | 1× |
| dNTPs (10mM quisque dNTP) | 200 μM |
| 25 mM MgCl2 | 1-4 mM |
| Taq DNA Polymerase (5U/μL) | 2-2.5 U |
| Primus 1 (10 μM) | 0.2-1 μM |
| Primus 2 (10 μM) | 0.2-1 μM |
| Formulaa | ≤10% Primum vinculum Reactionis Solutio (2 μL) |
| ddH2O | Ad 50 μL |
Notae:a: Si nimis solutio prima catenae reactionis additur, PCR reactionem inhiberi potest.
2.Procedure reactionem PCR
| Gradus | Temperature | Tempus | Cycles |
| Pre-denaturation | 95℃ | 2-5 mins | 1 |
| Denaturation | 95℃ | 10-20 sec | 30-40 |
| Annealing | 50-60℃ | 10-30 sec | |
| Extensio | 72℃ | 10-60 sec |
Notae
1.Apta ad transpositionem transpositionis temperaturae optimizationis in amplitudine 42℃~55℃.
2.Res melioris stabilitatis est, idonea caliditas e contrario transcriptio amplificationis.Praeterea favet ut efficaciter per regiones RNA structurales multiplices transeat.Etiam, itunius gradus multiplex fluorescentiae quantitatis RT-PC detectionis aptus est.
3.Bonum compatibilitas cum variis PCR amplificationibus enzymes et aptae ad altum sensitivum RT-PCR aperiendum est.
4.Apta ad altum sensitivum unum gradum fluorescens quantitatis RT-PCR reactionis, efficaciter detectionem rate minoris intentionum intentionum emendavit.
5.Apta ad cDNA bibliothecae constructionem.
