Rnase Inhibitor
Inhibitor Murine RNase est recombinans Murinum RNAse inhibitor expressum et purificatum ab E.coli.Ligat ad RNase A, B vel C in 1, ratione per compagem non covalentem, inhibens actionem trium enzymorum et RNA ab degradatione defendens.Attamen contra RNAse 1, RNase T1, S1 Nuclease, RNase H vel RNAse ab Aspergillo non valet.Murine RNase inhibitor ab RT-PCR, RT-qPCR et IVT mRNA probatus est, et compatible cum variis transcriptases commerciales inversas, DNA polymerases et RNA polymerases.
RNase inhibitoribus humanis comparatus, inhibitor RNase murinus duas cysteinas non continet quae oxidationis valde sensibilis sunt quae inhibitoris inactivationem causant.Quod efficiens illud stabilimentum ad concentrationes DTT humilis (minus quam 1 mM).Haec factura idoneam ad usum facit in reactionibus ubi concentrationes altos DTT reactioni adversas est (exempli gratia Real-time RT-PCR).
Aapplication
Productum hoc in quolibet experimento late adhiberi potest ubi impedimentum RNase potest ad degradationem RNA declinandam, ut:
1.Synthesis primae lineae cDNA, RT-PCR, RT-qPCR, etc.
2.Tuetur RNA a degradatione durante in vitro transcriptionis/translationes (exempli gratia in vitro systematis replicationis viralis).
3.Inhibitio RNAse actionis in RNA separatione et purificatione.
Repono Conditions
Productum reponi potest ad -25～- 15, validum per 2 annos.
Repono quiddam
50 mM KCl, 20 mM HEPES-KOH (pH 7.6, 25 ℃), 8 mM DTT et 50 glycerolum.
Unitas definition
Moles inhibitoris murini RNase requiritur ad prohibendum activitates 5ng ribonuclease A per 50% ut una unitas definita est (U).
Pondus hypotheticum dapibus
Inhibitoris murini RNase pondus hypotheticum est 50 kDa.
Regimen quālitātis
Exonuclease Actio:
40 U inhibitoris murini RNase cum 1 μg λ -Hind III digestum DNA in 37° per 16 horas nullam degradationem cedit ut ab agaroso gel electronico determinato.
Actio Endonuclease:
40 U inhibitoris murini RNase cum 1μ g λ DNA in 37° per 16 horas nullam degradationem cedit prout ab agaroso gel electronico determinato.
Nicking Actio:
40U inhibitoris murini RNase cum 1μ g pBR322 in 37℃ per 16 horas nullam degradationem cedit prout agarose gel electronica determinata est.
RNase Actio:
40U inhibitoris murini RNase cum 1.6μ g MS2 RNA pro 4h in 37℃ nullam degradationem reddit sicut agarose gel electronicae determinatae.
E.coli DNA:
40 U inhibitoris murini RNAse obiectu faciei E. coli genomic DNA utens TaqMan qPCR cum primers specificis pro E. coli 16S rRNA locus.Contaminatio genomica DNA Coli E. est ≤ 0,1 pg/40 U.
Notes
1. Violenta oscillatio vel incitatio ad enzyme inactivationem ducet.
2. Optima temperatus range huius inhibitoris erat 25-55℃, et in actu 65℃ et supra.
3. Actiones RNase H, RNase 1 et Rnase T1 ab inhibitore murino RNase non obstabant.
4. Inhibitio RNase actionis in amplis pH (pH 5-9 erant omnes activae) inventa est, et summa actio pH 7-8 observata est.
5. Cum ribonucleases typice retinent actionem sub conditionibus denaturing, cavendum est ne RNase Inhibitor moleculae denaturae quae cum ribonuclease implicantur.Ad emissionem ribonuclease activae praecavendam, temperaturas maiores quam 50 °C et concentrationes altorum ureae vel aliorum agentium denaturing vitandum est.
