Uracil DNA Glycosylase
Uracil-DNA Glycosylase (UNG vel UDG) est recombinans clone E.coli cum pondere hypothetico 25 kDa.Liberi uracilii liberationem catalysem ab uracil-DNA uno subductis et subductis contentis, contra RNA otiosa est et adhiberi potest ne contagione PCR amplificationis productorum adhibeatur.Principium actionis ex eo innititur quod, si dUTP substituatur dTTP in PCR reactione et PCR amplificationis productum continens dU bases formatur, enzyme seligi potest vinculum glycosidicum basis U subductis et subductis in uno subductis DNA degradare et pcr amplificationem producti.
Commendatur Application
Contaminatio praeventionis amplificatio
Repono Condition
-20°C per longum tempus repositionis, ante usum bene misceri debet, evitandae frequentes gelatae.
Repono quiddam
20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, Stabilizer, 50 Glycerol.
Unitas Definition
Moles enzyme ad 1µg detrudere debebant DNA simplicium subductis in quibus dU bases in hora 1 37°C est unitas.
Regimen quālitātis
1.SDS-Paginae electrophoreticae puritatis major XCVIII%
2.Sensus amplificatio, massae imperium, stabilitas
3.Post 1U de UNG agitur in 50℃ pro 2min, Formula continens U infra 103 codices penitus degradetur nec productum amplificatio produci potest.
4.Non exogenous nuclease actio
Instructiones
| Components | Volumen (μL) | Finalis concentration |
| X PCR Buffer (dNTP gratis, Mg²+Liber) | 5 | 1× |
| dUTPs (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 μM |
| dUTP (reponere dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μL | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0.25 | 1.25 U |
| 5 U/μL UNG | 0.25 (0.1-0.5) | 0.25 U (0.1-0.5) |
| 25 Primario Mixa | 2 | 1× |
| Formula | - | ＜1μg/reactionem |
| ddH₂O | Ad 50 | - |
Nota: a: Si usus pro qPCR/qRT-PCR, specillum fluorescentium in systematis reactionem addi debet.Solet finalis intentio prima 0.2 μM fructus bonos dare potest;Cum pauper effectus reactionem est, prima intentio accommodari potest in ambitu 0.2-1 μM.Plerumque, specillum retrahitur optimized est in amplitudine 0.1-0.3 μM.Concentratio graduum experimentorum perfici potest ut optimam primitivae compositionem et explorationem invenias.
Notae
1.UNG enzyme adhiberi potest ad amplificationem amplificationis dUTP contaminatorum removendas res ex reactione systemate ante reactionem amplificationis PCR, deinde ad vitare falsos-positivos eventus ex producto contagione.
2.Optimam temperiem pro UNG enzyme adhibendam in anti-contamento PCR reactionis est fere 50℃ pro 2minis;conditio inactivatio 95℃ pro 5min.
3.Fugientes crebris gelidis, et magnis ambigua temperatura ne exponas.
4.Diversa generum ampliandarum diversae utendi efficientiam dUTP et sensibilitatem ad UNG enzyme habent, ergo, si usus systematis UNG minui in deprehensione sensitivum ducit, ratio reactionis aptari debet et optimized, si subsidio technico opus est, pete contactum. societas nostra.
