Muris Genotyping Kit
Cat No: HCR2021A
Hoc productum est ornamentum ad identificatio celeris muris genotypes destinata, inclusa DNA rudis extractionis et PCR amplificationis ratio.Productum per amplificationem directe adhiberi potest a muris cauda, auris, pollicem et aliis textibus post fissuram simplicem a Lysis Buffer et Proteinase k.Nulla digestio pernoctare, extractio phenol-chloroformi seu columnae purificationis, quae simplex est et tempus experimentorum consumendi minuit.Productum idoneum est ad amplificationem fragmentorum scoporum usque ad 2kb et multiplices PCR reactiones cum usque ad 3 paria primariorum.Mus TEXTUS Direct PCR Mix continet genere machinatum DNA polymerase, Mg2+, dNTPs et quiddam optimized systematis ad amplificationem efficientiae et inhibitoris tolerantiae altam praebent, ita ut PCR reactiones peragi possint addendo templates et primarios et rehydrationem producti ad 1×.Productum PCR cum hoc productum ampliatum habet eminentiam "A" basim in fine 3′ et directe adhiberi potest pro TA exquisitae post purificationem.
Components
Component | Magnitudo |
2×Mus Tissue Direct PCR Mix | 5×1.0mL |
Lysis Buffer | 2×20mL |
Dapibus K | 800μL |
Repono Conditions
Producta condi debent in -25~-15℃ pro 2 annis.Postquam dilapsa est, Lysis Buffer in 2~8℃ ad breve tempus multiplex usus condi potest, ac bene utendo miscere.
Applicationem
Productum hoc aptum est analysi muse knockout, detectio transgenica, genotyping et sic porro.
Features
1 .Simplex operatio: nullum opus genomicum DNA extrahere;
2.Lata applicatio: apta ad directam amplificationem variorum mus textuum.
Instructiones
1 .Dimissio genomic DNA
I) Praeparatio lysate
TEXTUS lysatus praeparatur secundum numerum exemplorum muris lysedorum (textus lysatae praeparandae in-site secundum dosis et ad usum penitus permixtum), et proportio reagentium ad unum specimen requisita haec est:
Components | Volumen (μL) |
Dapibus K | 4 |
Lysis Buffer | 200 |
2) Sample Praeparatio et Lysis
Commendatur TEXTUS usus
Type ofTEXTUS | Commendatur Volume |
Mus caudam | 1-3mm |
mus aurem | 2-5mm |
mus pollicem | 1-2 pieces |
Sume congruam quantitatem textus musei in tubulis centrifugis mundis, adde 200μL de recenti texti lysate unicuique tubi centrifugii, vortice et quate, deinde incubare ad 55℃ 30 min, et deinde calori 98℃ pro 3min.
III) Centrifugación
Excute lysatum bene et centrifugium ad 12000 rpm pro 5minibus.Supernatans exempli causa adhiberi potest per amplificationem.Si templates repositionis opus est, supernatantem in aliam fistulam centrifugis sterilis transferet et ad viginti quinque septimanas reponet.
2.PCR amplificatio
2×Muss Tissue Dirige PCR Mix ab -20℃ et in glaciem tabescere, inverso misce et systema reactionem PCR iuxta sequentem tabulam praeparare (operantur in glacie);
Components | 25μLSystema | 50μLSystema | Finalis intentioni |
2×Mus Tissue Direct PCR Mix | 12.5μL | 25μL | 1× |
Primarius 1 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
Primus 2 (10μM) | 1.0μL | 2.0μL | 0.4μM |
Synthesis Producta | Ut requirere | Ut requirere |
|
ddH2O | Usque ad 25μL | Usque ad 50μL |
|
Nota:
a) Moles additae systematis 1/10 non excedere, et si nimium additur, PCR amplificatio inhiberi potest.
Commendatur PCR Conditions
cyclus gradus | Temp. | Tempus | Cycles |
Coepi denaturation | 94℃ | 5mins | 1 |
Denaturation | 94℃ | 30sec | 35-40 |
Annealinga | Tm+3~5℃ | 30sec | |
Extensio | 72℃ | 30 sec/kb | |
Extensio finalis | 72℃ | 5mins | 1 |
- | 4℃ | Hold | - |
Nota:
a) Annealing temperatura: Quantum ad valorem primi primi, commendatur ad minorem Tm valoris primi +3~5℃ ponendo temperatura furnum.
Communia Problemata et Solutiones
1 .Nulla iaculis videt
1) Nimia lysis aliqua.Formulae opportunissimam quantitatem elige, plerumque non plus quam 1/10 systematis;
II) Nimis magna magnitudine exempli.lysate 10 tempora dilue et postea amplifice, vel minue magnitudinem exempli et re- lysin;
3) TEXTUS exemplaria recentia non sunt.Commendatur recentibus texti exemplis uti;
4) Pauper prima qualitas.Utere genomic DNA ad amplificationem ut primigeniam qualitatem cognoscendam et optimize primarium consilium.
2.Non specificae amplificationis
1) Temperatura furnum nimis humilis est et numerus cycli nimis altus est.Temperamentum furnum auge et numerum cyclorum minue;
2) Formula retrahitur nimis alta est.Formulae moles minuere vel extenuare exemplum 10 temporibus post amplificationem;
3) Pauperum prima proprietas.Optimize primario consilio.
Notae
1 .Ut crux contagione inter exempla vitanda sit, multa instrumenta sampling praeparentur, et superficies instrumentorum cum solutione hypochlori sodium 2% sodium vel nuclei acidi mundiores post singulas sampling, si repetitus usus requiritur, purgari potest.
2.Commendatur recentibus fibris mus uti, et volumen sampling non est nimis magnum ad vitandum eventus amplificationis affectantes.
3.Lysis Buffer frequentes congelatios vitare debet et in 2~8 condi potest propter breve tempus multiplex usus.Si temperatura reposita, praecipitatio fieri potest, et ante usum plene dissolvi debet.
4.PCR Mix, crebris congelatis thaw vitare debet et in 4° ad breve tempus iteratum usum condi potest.
5.Productum hoc solum est ad investigationem experimentalem scientificam et in diagnosi vel curatione clinica adhiberi non debet.