Plant direct PCR Kit
Cat No: HCR2020A
Plant Direct PCR Ornamentum aptum ad directam amplificationem plantarum foliorum, seminum, etc., et adhiberi potest pro summo perputo obtegendo exemplaria plantarum quae polysaccharides et polyphenola non continent.Directa amplificatio DNA polymerasis secundum evolutionem directam habet superiorem tolerantiam ad PCR inhibitores in plantis.Interim conservat amplificationem peractam, quae apta est ad amplificationem DNA fragmentorum intra 5 kb.Unicum Lysis quiddam A in ornamentum adhiberi potest ad telas plantas novas vel congelatas lyse.Facile est operari et lysatus uti exemplum amplificationis sine purificatione.Systema tutelae agentium continet, quae exempla rudia efficaciter ampliari valeant post gelationem et tabidaque iterata.2× Plant Direct Master Mix only needs to add firsters and templates to perform amplification reaction, ita reducing pipetting operations and improving detection throughput and reproducibility of results.
Components
| Components | 50 RXNS | 200 RXNS |
| 2 Planta Direct Master Mix | 1.25 ml | 4×1.25 ml |
| Plant Direct Lysis Buffer A | 5 ml | 20 ml |
| Plant Direct Lysis Buffer B* | 5 ml | 20 ml |
*Plant Direct Lysis Buffer B reagens libitum est, quod corrumpere solebat Plant Direct Lysis Buffer A ad tempus exemplorum prolongandum.Adhiberi potest pro re ipsa.
Repono Conditions
2× Planta Magister Dirige Mix, reconde ad -30~-15℃ et devita saepe congelationem tabidaque;Plant Direct Lysis Buffer, copia apud -30~-15℃ vel 2~8℃.
Experimentum Processus
Sample Processing-Plant Folium
Modus directus:Commendatur foliis uti novellis.Utere foramine ferrum cum diametro fixa 0,5 – 3 mm, ut samplea parva et uniformis obtineant, et deinde specimen ad PC systematis directe adde (50 μl systema suadetur).Nota, fac specimen est in solutione PCR et non contra parietem tubi.Si directus PCR ad exempla longa fragmenta amplianda et multiplex exempla adhibetur, exempli causa cum diametro minore (0.5 – 1 mm) ut exemplum template, adiuvat ut meliores eventus obtineat.
Stridere Lysis methodum ;Commendatur foliis uti novellis.Accipe particulam folii (circiter 1 – 3 mm diametro), pone in 20 μl Plant Dirige Lysis Buffer Ab, et quam maxime tere (hoc passum fieri potest expresso folium cum 100 µl apice pipette. ad farraginem sample).Si maiora volumina folium texturae adhibentur (7 mm non excedunt), augeatur volumen dilutionis quiddam usque ad 50 µl.Post folia trita, solutio viridis apparebit.Post brevem centrifugationem, 1 μl supernatantis ad PC systema tamquam reactionem templatec adde .
Lysis scelerisque methodus:Commendatur foliis uti novellis.Accipe particulam folii (circiter 1 – 3 mm diametro), pone in 20 μl Plantam Direct Lysis Buffer A, et calefacies ad 95°C pro 5 – 10 min.Tempus lysis apte extendi potest ad folia difficilia ad lysam (non plus quam 20 min).Si maiora volumina folium texturae adhibentur (7 mm non excedunt), augeatur volumen dilutionis quiddam usque ad 50 µl.Post calefactionem, centrifugium breviter, et 1 µl supernatantis ad PCR systematis reactionem templateb adde.
Sample Processing-Plant semen
Stridere Lysis methodum ;Seminibus scalpello incidere cum diametro 5 mm, adde eas ad 100 μl Plantae Direct Lysis Buffer A, et tere specimen cum tip fistula vel aliis instrumentis.Vortex breviter et locus temperatus stet pro 3 – 5 min.Fac semen specimen in quiddam dilutionis demersum.Post brevem centrifugam, 1 μl supernatantis ad PC systematis quasi reactionem templates adde.
Lysis scelerisque methodus:Seminibus scalpello secare cum diametro 5 mm, adde ad 100 μl Plantae Dirige Lysis Buffer A, et calor 95°C pro 5 – 10 min.Tempus lysis apte extendi potest ad folia difficilia ad lysam (non plus quam 30 min).Post calefactionem, centrifugium breviter et 1 μl supernatantem ad PCR systematis tamquam reactionem templateb adde.
a.Scissores vel alia instrumenta adhibenda sunt etiam ad exemplaria certae magnitudinis incisa;si ferrum vel forfex reddi potest, purgari debent cum 2% sodium solutionis hypochloritae ante singulos usus, ne crux contagione inter exempla praecaveatur.
b.Fac ut Plant Direct Lysis Buffer ante usum plene liquefactum est.Si viscosum quiddam est aut praecipitat, calefieri potest ad 37℃ ante usum omnino illud liquefaciendi.
c.Volumen templates in systematis reactionis adaptari convenienter pro diversitate materiae in materia plantae et diluenti additae.
Plant Direct Lysis Buffer
Plant Direct Lysis Buffer A in hoc productum contentum stricte optimized ut genoma textuum plantarum maxime emitteret et ad breve tempus rudium plantarum 4℃ repositioni aptum est.Si specimen pro ampliore temporis spatio condi debet (eg, 1 – 2 mensium), commendatur supernatantem in novam tubi EP transferre et eam in -20℃ reponere.Exempla firmius repone, aequalem plantae volumen Dirige Lysis Buffer B ad supernatantem translatum, bene misce et repone in -20℃.Tempus repositum stabulum cum plantis exemplis et civitatibus variat.
Ratio reactionem
| ddH2O | Ad 20.0 µl | Ad 50.0 µl |
| 2 Planta Direct Master Mixa | 10.0 µl | 25.0 µ |
| Primarius 1 (10 µM) | 0.8 µl | 2.0 µl |
| Primarius 2 (10 µM)b | 0.8 µl | 2.0 µl |
| Plant folium / rudis extract sample(Quaere Sample Processing) | 0.5 – 3 mm folium disc/x µl | 0.5 – 3 mm folium disc/x µl |
a.Habet Mg *2+ad ultimam intentionem 2 mM.
b.Commendatur uti extrema intentione 0.4μM pro singulis primis.Immodicus usus primariorum auctam amplificationem non specificam ducet.
c.Moles exempli adhibiti secundum condicionem actualem adaptari possunt.Moles adhibita in una reactione exempli rudis lysedi accommodari potest inter 2% - 20% totius voluminis reactionis.Exempla per nimium defectum amplificationis causa facere possunt.
Program reactionem
| Vestigia | Temperature | Tempus |
| Denaturation Coepi | 98℃ | 5 min |
| Denaturation | 95℃ | 10 sec |
| Annealing | 58~ 72℃ | 15 sec |
| Extensio | 72℃ | 30 sec |
| Extensio finalis | 72℃ | 5 min |
a.Initialis Denaturatio (98℃, 5 min) lysin textus plantae promovet, DNA genomica solvens quae ad PCR amplificationem adhiberi potest.Tempus non minuit vel minuit siccus.
b.Commendatur eam aequalem priori Tm valore seu 2~ 4℃ altiori quam Tm valore.Recta amplificatio DNA polymerasis in hoc facto usus differt a conventionali Taq DNA polymerasi, et speciales requisita habet ad motus furnum temperatus. Usus altae temperatoris furnum non specificae amplificationis efficaciter minuere et augere efficientiam amplificare potest.Pro complexis exemplaribus, amplificatio efficiens potest fieri componi furnum temperiem et extensionem temporis prolongare.
c.Si longitudo amplificationis productum sit ≤1 kb, tempus protractum constituetur ad 30 sec/kb;si longitudo amplificationis productum est >1 kb, tempus protractum constituetur ad 60 sec/kb.
d.Exemplaria enim complexa vel exempla cum amplificatione gravi cedunt, numerus cyclorum apte augeri potest ad 40 -50 cyclos.
Applications
Applicatur ad directam amplificationem fibrarum plantarum et summorum perputium obtentu plantarum speciminum quae polysaccharides et polyphenola non continent.
Notae
Nam elit nisi.Non ad usum diagnostica procedendi.
1. Ad crudam plantam amplificationem vel amplificationem directam, commendatur uti DNA genomica purgata tamquam potestate positiva, antequam experimentum incipiat curare ut systema, primarium et operationes sint rectae.
2. DNA polymerasis directa amplificatio in hoc ornamento adhibita magnam probationem activitatem habet.Si TA exquisitis operibus exsequi debet, commendatur ut DNA purgaret antequam adeninum adderet.
3. Primario Design Ductu
a.Commendatur ut ultima basis in 3° primi primi G vel C sit.
b.Mismatches consecutivae vitentur in ultimis 8 basium in 3° primi primi.c.Vitare derepta structurae in 3′ fine primario.
d.Differentiae in Tm valoris prioris prioris et e contrario primario non plus quam 1℃ ac valorem Tim ad 60~ 72℃ accommodetur (Primer Premier 5 commendatur ad valorem Tim computandum).
e.Extra additamenta primariorum sequentium, quae cum Formulario non concordant, includi non debent cum de primario Tm valore computando.
f.Commendatur GC contentum primarii esse 40%-60%.
g.Distributio primario A, G, C, T altiore quam maxime debet esse.Vitare regiones magna GC vel AT contenta.
h.Fugiat praesentiam sequentiarum complementariorum 5 vel plurium basium sive in primario sive inter duos primores et fugito sequentium complementariorum III vel plurium basium in 3° fine duorum primariorum.
ego.Utere munus NCBI BLAST ad reprimendam specificitatem primi ad amplificationem non specificandam.
