DNA Extraction Mini Kit
Hoc ornamentum quiddam optimized systematis adoptat et technologiam silicam columnae purgationis, quae 70 bp – 20 kb DNA e fragmentis variis concentratione TAE vel TBE agarosi gel recuperare potest.DNA adsorptio columna specialiter adsorpendam DNA sub conditione salis alta.Praeterea ornamentum DNA fragmenta directe purgare potest ex PCR productis, reactionis enzymaticae vel DNA rudis ab aliis modis productis impetratis, et immunitates amovere ut servo, aliis compositionibus organicis, inorganicis salsis et oligonucleotide primariis.Curare potest ut purificatio intra 10-15 min compleatur.DNA purificatus directe adhiberi potest ad ligationem, transmutationem, enzyme digestionem, in vitro transcriptione, PCR, sequencing, microiniectionem, etc.
Repono conditionibus
Thesaurizate ad -15~-25℃ et transportare ad locus temperatus.
Components
| Components | (100 rxns) |
| Quiddam GDP | 80 ml |
| Quiddam GW | 2 20 ml |
| Elution Buffer | 20 ml |
| FastPure DNA Mini Columns-G | 100 |
GDP quiddam:DNA ligans quiddam.
GW quiddam:Lavatio quiddam;Adde absolutum ethanolum ab indicato volumine in utre ante usum.
Buffer Elution:Elution.
FastPure DNA Mini Columns-G:DNA adsorption columns.
Collectio Tubuli 2 ml:Collectio fistularum pro filtratu.
Paravit Materias
1.5 ml tube sterilis, ethanolum absolutum et isopropanolum (cum DNA fragmento ≤100 bp, volumen 1 adde
isopropanol to 1 vo- gel), balneum aquae.
Experimentum Processus
80 ml ethanoli addere ad Buffer GW extenuandum ut in tag ante usum indicatum, ad cella temperiei repone.
Mechanismus
1. PCR reactionem solutionem
Systema gel extractionis: Adde aequalem volumen Buffer GDP PCR motus solutionis recuperationis schema:Add 5 times volumen Buffer
2. GDP Computare volumen gel (100 .) μl est C mg)
Dissolve gel
3. Preheat at 50 ~ 55℃
4. Liga lava
Adde 300 μL de Buffer grossi*
700 μL addere of Buffer GW
700 μL addere of Buffer GW
5. Elute
Adde 20 - 30μL de Elutionis Buffer vel aqua deionizata
Notae * PC reactionem fluidum convaluisset sine hoc passu
gel progressio extractionem
1. Post DNA electrophoresis in fragmentis DNA fractis, excidit clavum unicum DNA fragmenti e gel agaroso sub UV luce.Commendatur ut charta bibula utatur ut humorem gel absorbeat et magnitudinem gel segmenti minuat, extra agarosam quam fieri potest removendo.Segmentum gel (sine microcentrifugio) ad suum volumen computandum: Volumen 100 mg gelslicium circiter 100 µL est, si densitas 1g/ml est.
2. Adde aequalem volumen Buffer GDP, incubare 50~55℃ pro 7-10 min (secundum magnitudinem gel; incubationis tempus compone donec gel omnino dissolvatur).Tubus 2 temporibus incubationis invertere.
Δ Additio 1-3 voluminum Buffer GDP non movebit DNA efficaciam recuperandi.Si DNA fragmentum restitui <100 bp, 3 volumina Buffer grossi addi oportet;Cum segmentum gel penitus dissolutum est, volumen isopropanol 1 adde et permisceto, deinde ad gradum proximum progredi.
3. Centrifugium breviter specimen ad fundum tubi afferendum, FastPure DNA Mini Columns-G inmitte in collectionem tubes 2 ml, solutionem maxime 700 μL semel diligenter transfer.
tempus ad columnas filtrationis, centrifugium ad 12000 rpm (13,800 X g) pro 30-60 sec.
4. Filtratum abiicias et adde 300 μL Buffer GDP columnae, incubant cella temperies pro 1 min, centrifugium ad 12,000 rpm (13,800 X g) pro 30-60 sec.
5. Filtratum abiicias et adde 700 μL Buffer GW (reprehendo si ethanolum absolutum in antecessum additum est!) ad columnam, centrifugium ad 12000 rpm (13,800 X g) pro 30-60 sec.
Δ Quaeso adde Buffer GW circa adsorptionem columnae parietis, vel operculum dorsum Buffer GW adiicere et inverso miscere pro 2 – 3 temporibus ut auxilium sal totaliter parieti tubi adhaerens rubeat.
6. Iterare gradum 5 .
Δ Flushinga cum Buffer GW bis efficere potest ut sal totaliter tollatur et ictum in experimentis subsequentibus removeat.
7. Linamentum et centrifugium abiicias columna vacua ad 12000 rpm (13,800 X g) pro 2 min.
8. Inserere columnam in tubum microcentrifugium purum 1.5 ml, adde 20 - 30 µL of Elution Buffer ad centrum columnae membranae incubare pro 2 min, et dein centrifugium ad 12000 rpm (13,800 X g) for1 min.Relinquere columnam, nactus DNA repone ad -20.
Δ supernatantem gradus 8 ad columnam transferendo iterum elutare et elutionem Buffer ad 55 (cum DNA fragmentum >3 kb) augere adiuvat forte recuperationem efficientiam.
PCR products recuperatio progressio
Protocollum hoc pertinet ad fragmenta DNA purganda a PCR productis, reactionis enzymaticae aliisque DNA productis rudibus (inclusa genetica DNA).Haec solutio efficienter varias nucleotidas, primarios, primarios dimers, salem moleculas, enzymes aliasque immunditias removere potest.
1. Breviter centrifugium PCR productorum, solutio reactionis enzymaticae, et aliorum DNA productorum crudorum.Eorum volumen cum pipette aestima et transfer ad fistulam sterilis 1.5 ml vel 2 ml.Adde ddH2O usque ad volumen usque ad 100 μL;dum ad genomicam DNA magna concen- tratione, ad 300 μL cum ddH2O diluendum adiuvabit ad efficientiam recuperandam meliorem.
2. Adde 5 volumina Buffer grossi, invertendo vel vortice permisceto.Si DNA fragmentum usuris >100 bp, additis 1.5 voluminibus (exempla + Buffer GDP) addenda est ethanol.
3. Columnam retro in fistulam collectionem inserere, mixturam columnae transfer, centrifugium ad 12000 rpm (13,800 ×g) pro 30 – 60 sec.Si solidum solutionis mixtae est >700 µL, adsorptionem columnae in fistulam collectionem repone, reliquam solutionem columnae adsorptionis transfer, et centrifugium ad 12000 rpm (13,800 × g) pro 30 – 60 sec.
4. Proximus effectus refertur ad gradum 5 - 8 de 08- 1/Gel progressio extrahendi.
Applications
Variae concentrationes TAE vel TBE agarose gel;PCR productorum, reactionis enzymaticae systemata vel aliorum DNA rudium productorum variis modis obtentis.Recepit fragmenta ranged ex70 bp -20 kb.
Notae
Nam elit nisi.Non ad usum diagnostica procedendi.
1. 80 ml ethanoli addere ad Buffer GW extenuandum ut in tag ante utendum indicatum, ad cella temperiei repone.
2. Si Buffer GDP in repositione humilitatis ad praecipitandum facile est, ad cella temperies per spatium temporis ante usum collocari potest.Si opus est, in balineum aqua conici potest 37℃, donec praeruptus ex toto dissolvatur, deinde mixtis uti potest.
3. Pone aquam balnei temperatus ad 50 ~ 55℃ in antecessum.
4. In 08-1/gel progressionis gradus extractionis 1, extenuando magnitudinem segmenti gel signanter minuet tempus dissolvens et efficientiam recuperandi auget (DNA linearised facile hydrolyzare cum in caliditate continenter exposita est).Noli exponere DNA gel ad UV diu, sicut lux ultraviolacea damnum causare potest.
5. Dissolve gel in 08- 1/Gel programma extrahendi gradus 2 perfecte, alioquin efficientia DNA recuperatio graviter afficietur.
6. Preheat Elution Buffer seu ddH2O ad 55℃ , quod adiuvat ad efficientiam elutionis emendandam DNA.Commendatur condere DNA in eluent 2.5 mM Tris-HCl, pH 7.0– 8.5.
